Minta előkészítése:
Minta gyűjtése: Gyűjtsük össze a mintákat, például a vér, a szövet, a nyál és a vizelet a kísérlet célja szerint.
DNS -extrakció: Használjon egy dedikált DNS -extrakciós készletet a DNS kivonására a mintából.
PCR reakció előkészítése:
Tervezési alapozók: A sablon DNS amplifikációjának célszekvenciáján alapuló specifikus primerpárok tervezése.
Készítse el a reakcióelegyet: beleértve a sablon DNS -t, a primereket, a puffert, a DNS -polimerázt, a DNTP -ket (dezoxinukleozid -trifoszfátok), Mg 2+ stb.
A PCR program beállítása:
PCR műszerbeállítások: Írja be az előre beállított PCR -ciklus paramétereit, például a 95 fokos előmelegítési hőmérsékletet, a denaturációs hőmérsékletet (például 95 fokos), az izzítási hőmérsékletet (például 55 fok), a meghosszabbítási hőmérsékletet (például a 72 fokot) és a ciklusok számát.
PCR reakció:
Adjon hozzá mintát: Adja hozzá a reakcióelegyet a PCR reakciókartályhoz vagy chiphez, és minden mintának általában egy reakciója van.
Végezzen PCR -t: A PCR műszerciklusok az előre beállított program szerint, beleértve a fűtést, a hűtést, az izzításokat és a kiterjesztési lépéseket.
Termékelemzés:
Hűtés az amplifikáció után: A PCR befejezése után a mintát röviden lehűtjük 4 fokon.
Elektroforetikus elválasztás: Használjon gélelektroforézis technológiát, például agarózgélelektroforézist, különféle hosszúságú PCR -termékek elválasztására.
Fluoreszcencia -szkennelés: A fluoreszcensen jelölt primerek egy specifikus hullámhosszú fényt bocsátanak ki az amplifikált termékben, és a PCR műszer ezeket a jeleket elolvassa és rögzíti azokat.
Adatfeldolgozás és értelmezés:
Adatelemző szoftver: A speciális szoftver segítségével elemezheti a fluoreszcens jelet, és kiszámítja a célfragmentum koncentrációját vagy relatív koncentrációját.
Eredmény értelmezése: A PCR -görbe és az alapvonal alapján határozza meg, hogy a PCR sikeres -e, létezik -e a célfragmentum, és mennyi.
Eredmény rögzítése és megőrzése:
Rögzítse az eredményeket a kísérleti jelentésben, és megfelelően megőrizze az eredeti adatokat és a mintákat.